Биологические особенности силосования люцерны с препаратами молочнокислых бактерий

УДК 636.085.52:579.64

Биологические особенности силосования люцерны с препаратами молочнокислых бактерий

Победнов Ю. А., доктор сельскохозяйственных наук

Мамаев А. А., кандидат сельскохозяйственных наук

Широкоряд М. С.

Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии им. В. Р. Вильямса

141055, Россия, Московская обл., г. Лобня, Научный городок, корп. 1

E-mail: vniikormov@yandex.ru

Исследования проводили на базе ФНЦ «ВИК им. В. Р. Вильямса». В опытах изучали особенности биохимических и микробиологических процессов, протекающих при силосовании провяленной массы люцерны с препаратом молочнокислых бактерий «Биотроф», а также влияние препарата «Биотроф» на сохранность и биохимические показатели силоса. В качестве сырья для силосования использовали люцерну изменчивую сорта Пастбищная 88, убранную в фазу бутонизации, которую предварительно в течение 5 ч провяливали в прокосах до содержания сухого вещества 38,06%. Выявлены биологические особенности силосования провяленной люцерны с молочнокислыми заквасками. Они сводятся к тому, что, в отличие от силосования провяленных злаковых трав, силосование провяленной люцерны сопровождается более благоприятным процессом брожения. В результате подкисление такой массы препаратами молочнокислых бактерий приводит к заметному сокращению потерь питательных веществ и увеличению энергетической питательности сухого вещества полученного корма. Следует отметить и высокую интенсивность протеолиза, сопровождающегося накоплением большого количества аммиака в первую фазу силосования люцерны. Так как буферное действие аммиака в значительной мере зависит от степени подкисления массы, то увеличение скорости подкисления провяленной люцерны под влиянием внесённых препаратов молочнокислых бактерий служит решающим условием получения корма, стабильного при хранении. Немаловажно и то, что стимуляция молочнокислого брожения приводит к тому, что в люцерне, наряду с сахаром, сбраживается и образовавшаяся в большом количестве при её провяливании яблочная кислота, что усиливает подкисление корма. Необходимо отметить и наличие в силосе из провяленной люцерны большого количества некультивируемых, а следовательно, и неизвестных к настоящему времени бактерий. Последние устойчивы к высокой кислотности и при внесении молочнокислых заквасок могут доминировать в силосе в течение длительного периода, оказывая влияние на его биохимические показатели.

Ключевые слова: силос, люцерна, препараты молочнокислых бактерий, протеолиз, аммиак, микрофлора.

Установлено (Производство грубых кормов, 2002; Победнов, 2009), что при силосовании провяленных трав прежде всего угнетается молочнокислое брожение. Это особенно заметно в первый, самый решающий этап силосования. Медленное подкисление силосуемой массы способствует активному размножению нежелательных микробов, преимущественно энтеробактерий, которые в значительно большей степени, чем молочнокислые бактерии, адаптированы к условиям брожения в провяленной массе (Pahlow, 1991). Интенсивность развития этих бактерий тем выше, чем в большей степени провяленные травы обеспечены сахаром (Панкратов, 2009). То есть в наибольшей степени это проявляется при силосовании в провяленном виде хорошо обеспеченных сахаром злаковых трав.

Энтеробактерии, являясь конкурентами молочнокислых бактерий в использовании сахара, создают дефицит последнего в силосуемой массе. В результате масса уже не способна подкислиться до предела, устраняющего развитие клостридий, что обуславливает возникновение в ней вторичной ферментации, приводящей к накоплению в корме большого количества масляной кислоты. Для того чтобы не допустить этого, следует ускорить подкисление массы до предела, исключающего развитие энтеробактерий. При силосовании трав, провяленных до содержания сухого вещества >30<45%, таким пределом является рН≤4,3 (Pahlow, Weissbach, 1999). С быстрым созданием в корме высокой активной кислотности в основном и связана высокая эффективность применения препаратов молочнокислых бактерий при силосовании провяленных злаковых трав (Muck, 2012; Шпаков, Фицев, Победнов и др., 2005).

Другое дело, если речь идёт о силосовании провяленной люцерны. В отличие от микробного обсеменения злаковых трав, среди эпифитов люцерны энтеробактерии уже не составляют значительной доли (Шурхно, 2016). Не получают они активного развития и при силосовании провяленной люцерны (Йылдырым, 2017). Указанные особенности обуславливают благоприятный процесс брожения провяленной массы люцерны, который, в отличие от обычного силосования провяленных злаковых трав, уже не сопровождается большими потерями питательных веществ. Понятно, что и эффект от использования препаратов молочнокислых бактерий в этом случае будет совершенно другим.

Целью настоящей работы является установление целесообразности, изучение особенностей и эффективности силосования провяленной люцерны с препаратами молочнокислых бактерий.

Методика исследований. Исследования проводили на базе ФНЦ «ВИК им. В. Р. Вильямса». В первом опыте изучали особенности биохимических и микробиологических процессов, протекающих при силосовании провяленной массы люцерны с препаратом молочнокислых бактерий «Биотроф». В качестве сырья для силосования использовали люцерну изменчивую (Medicago sativa L. nothosubsp. varia (Martyn) Arcang) сорта Пастбищная 88, убранную в фазу бутонизации, которую предварительно в течение 5 ч провяливали в прокосах до содержания сухого вещества 38,06%. Динамику рН, аммиака, сахара и кислот брожения изучали при силосовании люцерны в 0,5-литровых лабораторных сосудах. Силос анализировали через 0, 4, 7, 14, 28, 60 и 90 суток хранения. Одновременно полученные образцы корма замораживали при температуре –25⁰С и отправляли на микробиологический анализ в молекулярно-генетическую лабораторию компании «Биотроф», где в них методом T-RFLP определяли динамику численности и видового состава микроорганизмов по срокам хранения силоса.

Во втором и третьем опыте изучали влияние препарата молочнокислых бактерий «Биотроф» на сохранность и биохимические показатели силоса из люцерны Пастбищная 88, убранной в фазе бутонизации и провяленной в прокосах до содержания сухого вещества 36,5 и 43,9%. Силос готовили в 0,5-литровых лабораторных ёмкостях, оснащённых устройствами для учёта выделившихся газов, обычным способом и с внесением препарата «Биотроф» (в рекомендуемой заводом-изготовителем дозе).

Содержание сухого вещества в зелёной массе и полученном корме определяли путём высушивания навесок при температуре 105⁰С до постоянного веса, сахара — по Бертрану, аммиака — по Лонги, рН — с помощью потенциометра И-500, органических кислот (молочной, уксусной, масляной, муравьиной, пропионовой, янтарной, яблочной, лимонной, винной, щавелевой) — методом капиллярного электрофореза.

Статистическая обработка проведена с использованием t-критерия Стьюдента. Достоверными считали результаты при р < 0,05.

Результаты исследований. Биохимические показатели силоса, приготовленного с препаратом «Биотроф» из провяленной до содержания сухого вещества 38,06% люцерны, при разных сроках хранения представлены в табл. 1.

1. Биохимические показатели силоса, приготовленного с препаратом «Биотроф» из провяленной (до 38,06% СВ) люцерны по срокам хранения

Примечание: ¹ — разница достоверна по отношению к показателю корма предыдущего срока выемки; ² — других органических кислот не обнаружено.

Из представленных данных следует, что под влиянием препарата «Биотроф» рН массы спустя 4 суток силосования уже снизился на 1,29 единицы и практически достиг значения, критического для маслянокислых бактерий при данном содержании сухого вещества. При этом к этому сроку в массе было сброжено менее половины содержащегося в растениях сахара. Правда, необходимо отметить и то, что в этом случае в процесс молочнокислого брожения, наряду с сахаром, очевидно, вовлекалась и содержащаяся в большом количестве в провяленной люцерне яблочная кислота, содержание которой спустя 4 суток ферментации сократилось в 1,6 раза, а также лимонная кислота.

По мере увеличения срока хранения силоса до 90 дней его рН снизился с 4,71 до 4,23, то есть всего на 0,48 единицы. Произошло это за счёт дальнейшего сбраживания как содержащегося в люцерне сахара, так и яблочной кислоты, количество которой по сравнению с её содержанием в силосе четырёхсуточной ферментации сократилось почти в 2 раза. Скорость подкисления силоса, особенно из люцерны, служит непременным условием обеспечения его стабильности при хранении. Это связано с тем, что даже при силосовании люцерны в провяленном виде в ней интенсивно протекает протеолиз, сопровождающийся накоплением в корме большого количества аммиака.

Наибольшее негативное воздействие аммиака на сохранность и качество корма отмечается в самом начале силосования, когда рН силосуемой массы ещё достаточно высок. Так, если при рН — 4,26–4,46 для смещения рН в 100 г клеверного силоса в щелочную сторону на 0,2 единицы требуется 56 мг аммиака, то при рН — 6,40–6,60 — всего 8 мг (Зубрилин, Мишустин, 1958). Таким образом, ускорение подкисление силоса из провяленной массы люцерны за счёт внесения молочнокислых заквасок заметно снижает негативное влияние образующегося при протеолизе аммиака, создавая условия для быстрой стабилизации силоса в анаэробных условиях.

Особенностью люцерны служит и то, что количество образовавшегося при её силосовании аммиака резко возрастает по мере снижения содержания сухого вещества в зелёной массе. С учётом острого дефицита сахара в люцерне это оказывает решающее влияние на эффективность её силосования с препаратами молочнокислых бактерий. Согласно имеющимся данным (Победнов, Мамаев, Иванова, 2016), если при силосовании люцерны с содержанием сухого вещества 38,4% в ней (в расчёте на СВ) накапилось всего лишь 0,18–0,19% аммиака, вследствие чего рН готового корма под влиянием внесённого препарата «Биотроф» снизился с 6,02 до 4,62, то есть на 1,4 единицы, то при содержании сухого вещества в люцерне 31,3% в ней образовалось уже 0,54–0,62% аммиака, в результате рН обычного и приготовленного с препаратом «Биотроф» силоса оказался практически одинаковым — 5,06 и 5,02. То есть в первом случае препарат «Биотроф» оказался эффективным, обеспечив получение стабильного при хранении силоса, тогда как во втором случае он оказался совершенно бесполезным.

Как уже отмечалось, причиной последнего послужило интенсивное образование аммиака, буферное действие которого резко возросло на фоне высокого рН. В итоге даже при стимуляции молочнокислого брожения за счёт внесения одноимённых препаратов образовавшихся кислот уже не хватает для преодоления высокой буферности аммиака. В этой связи особое значение приобретает содержание сухого вещества в силосуемой люцерне. Наши исследования показали (Победнов, Мамаев, Широкоряд, 2019), что минимальное накопление аммиака и максимальное подкисление силоса под влиянием внесённого препарата «Биотроф» отмечается лишь при быстром провяливании люцерны до содержания сухого вещества 40–45%.

При оценке качества силоса учитывают отсутствие или наличие в нём масляной кислоты. Полученные нами результаты показали, что некоторое количество масляной кислоты (0,06% в СВ) образуется уже в процессе провяливания люцерны в прокосах. Некоторые исследователи (Зубрилин, Мишустин, 1958) считают это следствием нарушения жирового обмена в растениях, возникающего на фоне кислородного голодания провяливаемой массы. В течение первой недели силосования провяленной люцерны наблюдается дальнейшее накопление масляной кислоты до 014% (р < 0,05), после чего её содержание стабилизируется и остаётся постоянным в течение всего последующего срока хранения корма. С учётом начавшегося образования масляной кислоты при провяливании люцерны можно предположить, что какая-то её часть может образоваться чисто биохимическим путём и в самом начале силосования, то есть когда ещё не утратившие жизнеспособность растения помещаются в условия прогрессирующего анаэробиоза. Однако тот факт, что накопление масляной кислоты находится в определённой зависимости от содержания аммиака указывает на то, что в процессе её образования определённую роль могут играть и микробы. Однако какие? Микробиологические исследования, выполненные в молекулярно-генетической лаборатории ООО «Биотроф», показали, что общая обсеменённость провяленной люцерны микробными организмами составляла 4,5×10⁸/г и возрастала до 4,0×10⁹–1,7×10⁹/г в процессе силосования зелёной массы с препаратом «Биотроф». Соотношение видов микроорганизмов при разных сроках хранения силоса показано в табл. 2.

2. Состав микроорганизмов в силосе из провяленной (38,06% СВ) люцерны, приготовленного с препаратом «Биотроф», по срокам хранения, %

Из данных, представленных в табл. 2, следует, что внесение препарата «Биотроф» привело к доминированию молочнокислых бактерий с самого начала силосования провяленной массы люцерны. Их доля в общем количестве силосных организмов спустя 4 суток силосования составляла 63,3%, а спустя неделю достигла 73,2%. Это способствовало интенсивному накоплению молочной кислоты и быстрому созданию в корме высокой активной кислотности. Клостридии в небольшом количестве были обнаружены лишь в одном из образцов люцернового силоса. На этом основании можно заключить, что они не играют заметной роли в образовании масляной кислоты в провяленной массе люцерны, силосуемой с молочнокислыми заквасками. В то же время следует отметить увеличение доли актиномицетов (до 14,0–7,8%), которая отчётливо возрастает по мере подкисления до рН ≤ 4,31. Эти микробы считаются нежелательными при силосовании (Йылдырым, 2017), так как наряду с углеводами активно сбраживаются и образовавшиеся в силосе органические кислоты. Необходимо обратить внимание и на наличие в люцерновом силосе большого количества некультивируемых бактерий, которые не растут на обычных питательных средах и по этой причине не относятся ни к какому определённому виду. Особо следует подчеркнуть то, что доля этих бактерий возрастает по мере подкисления корма до рН ≤ 4,31. На поздних этапах силосования провяленной массы люцерны с препаратами молочнокислых бактерий они становятся, по существу, доминирующими микробами. Тот факт, что некоторое количество масляной кислоты образуется в тот период, когда корм уже подкислен до предела, исключающего развитие маслянокислых бактерий (Победнов, Мамаев, Широкоряд, 2019), как раз и указывает на причастность к этому процессу некультивируемой группы бактерий.

Для оценки успешности силосования, наряду с накоплением масляной кислоты, важным показателем служит минимальная величина потерь питательных веществ. Результаты силосования провяленной до содержания сухого вещества 43,9% люцерны обычным способом и с препаратом «Биотроф» показали (табл. 3), что в последнем случае распад питательных веществ до газообразных продуктов возрастает в 1,6 раза (р < 0,05). Объясняется это тем, что стимуляция молочнокислого брожения и ускорение подкисления корма в данном случае уже не приводит к заметному подавлению жизнедеятельности основных газообразователей корма (энтеробактерий), активность которых, как следует из данных табл. 2, и без того уже сильно угнетена, а направлена лишь на усиление сбраживания содержащегося в растениях сахара. Этим и объясняется то обстоятельство, что потери питательных веществ при силосовании провяленной люцерны с молочнокислыми заквасками не только не сокращаются по сравнению с обычным силосованием, но даже несколько возрастают. Аналогичные результаты при силосовании провяленной люцерны обычным способом и с препаратами молочнокислых бактерий были получены и другими авторами (Вафин, Бикчитаев, Шакиров, 2017).

1. Объём выделившихся газов и биохимические показатели силоса из провяленной люцерны, приготовленного обычным способом и с препаратом «Биотроф»

Примечание: ¹ — разница достоверна по отношению к обычному силосу, р < 0,05.

Следует указать и на то, что ускорение и усиление подкисления силоса из провяленной люцерны под влиянием внесённого препарата «Биотроф» не приводили и к достоверному снижению содержания в корме аммиака и масляной кислоты. В первом случае это объясняется тем, что при столь высоком содержании сухого вещества в люцерновом силосе аммиак в основном образуется в результате протеолиза. Поскольку основные протеолитические ферменты, под влиянием которых до небелкового азота гидролизуется большая часть содержащегося в люцерне белка, проявляют свою максимальную активность при рН — 4,0 (Tao, Guo, Zhou, Undersander, Nandety, 2012), то ускорение подкисление корма не приводит к сколько-нибудь заметному сокращению накопления аммиака. Одинаковое же количество масляной кислоты в обычном и приготовленном с препаратом «Биотроф» люцерновом силосе объясняется тем, что в её образовании, наряду с биохимическими процессами, значительную роль играют некультивируемые бактерии, на которых, как было установлено выше, высокая активная кислотность корма не оказывает сдерживающего влияния.

Несмотря на то что внесение препаратов молочнокислых бактерий при силосовании провяленной люцерны не приводит к заметному повышению сохранности и энергетической питательности сухого вещества полученного корма, оно всё же способствуют повышению его продуктивного действия (Kurtoglu, Coskun, 2003). Причина этого явления доподлинно неизвестна. Принято считать, что это обусловлено увеличением массы рубцовой микрофлоры, которая служит для животных источником полноценного белка.

Заключение. Внесение молочнокислых заквасок при силосовании провяленной массы люцерны является целесообразным и эффективным приёмом, обеспечивающим стабильность корма при хранении и его высокие биохимические показатели. Это обусловлено тем, что буферное действие аммиака находится в прямой зависимости от степени подкисления корма. При быстром смещении рН силосуемой массы люцерны в кислую сторону количество аммиака, необходимого для подщелачивания корма, многократно возрастает, что создаёт необходимые условия для нормального заквашивания корма, чего обычно не наблюдается в случае медленного подкисления силоса на фоне интенсивно протекающего протеолиза. К особенностям силоса из провяленной люцерны следует отнести и наличие в нём большого количества некультивируемых на обычных питательных средах, а значит, и ещё не изученных к настоящему времени бактерий. Эти бактерии устойчивы к высокой активной кислотности, вследствие чего их жизнедеятельность не только не устраняется в результате ускорения подкисления силосуемой массы препаратами молочнокислых бактерий, но даже стимулируется ими в течение продолжительного времени, что может несколько ухудшать биохимические показатели полученного корма.

Литература

1. Производство грубых кормов (в 2 книгах) Кн. 1. / Под ред. Д. Шпаара. — Торжок: ООО «Вариант», 2002. — 360 с.
2. Победнов Ю. А. Новые подходы к прогнозированию эффективности и оптимизации процессов силосования трав / Ю. А. Победнов // Проблемы биологии продуктивных животных. — 2009. — № 3. — С.89–100.
3. Pahlow G. Role of microflora in forage conservation / G. Pahlow // Landbauforschung-Völkenrode. — 1991. — Sonderheft 123. — Р.26–36.
4. Панкратов В. В. Эффективность применения препаратов на основе молочнокислых бактерий при силосовании трав с различным содержанием сухого вещества и сахаро-буферным отношением: автореф. дис… канд. с.-х. наук. — М.: ВИК, 2009. — 16 с.
5. Pahlow G. New aspects of evaluation and application of silage additives / G. Pahlow, F. Weissbach // Landbauforschung-Völkenrode. — 1999. — Sonderheft 206. — Р.141–158.
6. Muck R. E. Microbiology of ensiling / R. E. Muck //ⅩⅥ International silage conference (Hämeenlinna, Finland, 2–4 July 2012). — Helsinki, 2012. — P.75–86.
7. Заготовка и использование силоса из провяленных трав с препаратом «Биотроф»: рекомендации / А. С. Шпаков, А. И. Фицев, Ю. А. Победнов и др. — М.: ФГОУ «РосАКО АПК», 2005. — 16 с.
8. Шурхно Р. А. Микробиологический препарат для биоконсервирования растительных ресурсов на основе новых штаммов Lactobacillus plantarum, выделенных из природных источников: автореф. дис. … д-ра биол. наук. — Щёлково: ФГБНУ ВНИТИБП, 2016. — 48 с.
9. Йылдырым Е. А. Особенности процессов ферментации при технологии производства сенажа / Е. А. Йылдырым // Вестник мясного скотоводства. — 2017. — № 3. — С.160–164.
10. Зубрилин А. А. Силосование кормов (теория вопроса) / А. А. Зубрилин, Е. Н. Мишустин. — М.: Издательство АН СССР, 1958. — 228 с.
11. Победнов Ю. А. К вопросу сенажирования и силосования люцерны с препаратами молочнокислых бактерий / Ю. А. Победнов, А. А. Мамаев, М. С. Иванова // Продовольственная безопасность сельского хозяйства России в XXI веке. Жученковские чтения Ⅱ. — М.: ООО «Угрешская типография», 2016. — С.180–188.
12. Победнов Ю. А. Динамика аммиака и масляной кислоты в зависимости от степени провяливания и способа силосования люцерны / Ю. А. Победнов, А. А. Мамаев, М. С. Широкоряд // Кормопроизводство. — 2019. — № 4. — С.41–46.
13. Вафин Ф. Р. Биологические препараты в консервировании зелёной массы люцерны / Ф. Р. Вафин, И. Т. Бикчитаев, Ш. К. Шакиров // Вестник технологического университета. — 2017. — Т. 20. — № 8. — С.131–133.
14. Short communication: Characteristics of proteolytic activities of endo- and exopeptidases in alfalfa herbage and their implications for proteolysis in silage / L. Tao, X. S. Guo, H. Zhou, D. J. Undersander, A. Nandety // Journal of Dairy Science. — 2012. — Vol. 95. — No. 8. — P.4591–4595.
15. Kurtoglu V. Effects of bacterial adding alfalfa silage on milk yield and milk composition of dairy cattle / V. Kurtoglu, B. Coskun // Revue Médecine. Vétérinaire. — 2003. — Vol. 154. — No. 12. — P.755–762.

Biology of alfalfa ensiling by lactic acid bacteria

Pobednov Yu. A., Dr. Agr. Sc.

Mamaev A. A., PhD Agr. Sc.

Shirokoryad M. S.

Federal Williams Research Center of Fodder Production and Agroecology

141055, Russia, the Moscow region, Lobnya, Science Town, 1

E-mail: vniikormov@yandex.ru

The investigations took place at the Federal Williams Research Center of Fodder Production and Agroecology. The research focused on silage biochemistry, microbiology, and storage as affected by lactic acid bacteria of the “Biotrof” preparation. “Pastbishchnaya 88” alfalfa was used for ensiling. Harvesting happened at the budding stage. Alfalfa mass was left to dry for 5 hours until dry matter (DM) content reached 38.06%. Alfalfa ensiling with lactic acid bacteria induced certain biological processes. In contrast to gramineous, fermentation of air-dried alfalfa was more effective. Application of lactic acid bacteria reduced nutrient loss and increased DM energy content in forage. Intensive proteolysis led to accumulation of high concentrations of NH₃ at the first ensiling stage. Since the ability of NH₃ to stabilize a reaction depends on mass acidity, rapid production of lactic acid is crucial for effective storage of silage obtained. Active accumulation of malic acid in air-dried alfalfa mass reduces forage pH as it gets converted into lactic acid together with sugar. There is also a high concentration of unknown bacteria in alfalfa silage. They are resistant to low pH and can dominate lactic acid bacteria for a long period, affecting silage biochemistry.

Keywords: silage, alfalfa, preparations of lactic acid bacteria, proteolysis, ammonia, microflora.

References

1. Proizvodstvo grubykh kormov (v 2 knigakh) Kn. 1. / Pod red. D. Shpaara. — Torzhok: OOO “Variant”, 2002. — 360 p.

2. Pobednov Yu. A. Novye podkhody k prognozirovaniyu effektivnosti i optimizatsii protsessov silosovaniya trav / Yu. A. Pobednov // Problemy biologii produktivnykh zhivotnykh. — 2009. — No. 3. — P.89–100.

3. Pahlow G. Role of microflora in forage conservation / G. Pahlow // Landbauforschung-Völkenrode. — 1991. — Sonderheft 123. — P.26–36.

4. Pankratov V. V. Effektivnost primeneniya preparatov na osnove molochnokislykh bakteriy pri silosovanii trav s razlichnym soderzhaniem sukhogo veshchestva i sakharo-bufernym otnosheniem: avtoref. dis… kand. s.-kh. nauk. — Moscow: VIK, 2009. — 16 p.

5. Pahlow G. New aspects of evaluation and application of silage additives / G. Pahlow, F. Weissbach // Landbauforschung-Völkenrode. — 1999. — Sonderheft 206. — P.141–158.

6. Muck R. E. Microbiology of ensiling / R. E. Muck // ⅩⅥ International silage conference (Hämeenlinna, Finland, 2–4 July 2012). — Helsinki, 2012. — P.75–86.

7. Zagotovka i ispolzovanie silosa iz provyalennykh trav s preparatom “Biotrof”: rekomendatsii / A. S. Shpakov, A. I. Fitsev, Yu. A. Pobednov et al. — Moscow: FGOU “RosAKO APK”, 2005. — 16 p.

8. Shurkhno R. A. Mikrobiologicheskiy preparat dlya biokonservirovaniya rastitelnykh resursov na osnove novykh shtammov Lactobacillus plantarum, vydelennykh iz prirodnykh istochnikov: avtoref. dis. … d-ra biol. nauk. — Shchelkovo: FGBNU VNITIBP, 2016. — 48 p.

9. Yyldyrym E. A. Osobennosti protsessov fermentatsii pri tekhnologii proizvodstva senazha / E. A. Yyldyrym // Vestnik myasnogo skotovodstva. — 2017. — No. 3. — P.160–164.

10. Zubrilin A. A. Silosovanie kormov (teoriya voprosa) / A. A. Zubrilin, E. N. Mishustin. — Moscow: Izdatelstvo AN SSSR, 1958. — 228 p.

11. Pobednov Yu. A. K voprosu senazhirovaniya i silosovaniya lyutserny s preparatami molochnokislykh bakteriy / Yu. A. Pobednov, A. A. Mamaev, M. S. Ivanova // Prodovolstvennaya bezopasnost selskogo khozyaystva Rossii v XXI veke. Zhuchenkovskie chteniya Ⅱ. — Moscow: OOO “Ugreshskaya tipografiya”, 2016. — P.180–188.

12. Pobednov Yu. A. Dinamika ammiaka i maslyanoy kisloty v zavisimosti ot stepeni provyalivaniya i sposoba silosovaniya lyutserny / Yu. A. Pobednov, A. A. Mamaev, M. S. Shirokoryad // Kormoproizvodstvo. — 2019. — No. 4. — P.41–46.

13. Vafin F. R. Biologicheskie preparaty v konservirovanii zelenoy massy lyutserny / F. R. Vafin, I. T. Bikchitaev, Sh. K. Shakirov // Vestnik tekhnologicheskogo universiteta. — 2017. — Vol. 20. — No. 8. — P.131–133.

14. Short communication: Characteristics of proteolytic activities of endo- and exopeptidases in alfalfa herbage and their implications for proteolysis in silage / L. Tao, X. S. Guo, H. Zhou, D. J. Undersander, A. Nandety // Journal of Dairy Science. — 2012. — Vol. 95. — No. 8. — P.4591–4595.

15. Kurtoglu V. Effects of bacterial adding alfalfa silage on milk yield and milk composition of dairy cattle / V. Kurtoglu, B. Coskun // Revue Médecine. Vétérinaire. — 2003. — Vol. 154. — No. 12. — P.755–762.