Создание исходного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости

УДК 633.322:630^*165.4.181.351

Создание исходного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости

Старшинова О. А.

Федеральный научный центр кормопроизводства и агроэкологии им. В. Р. Вильямса, лаборатория селекции и первичного семеноводства клевера

141055, Россия, Московская обл., г. Лобня, Научный городок, корп. 1

E-mail: o.starshinova@bk.ru

В статье изложены результаты исследований по созданию исходного материала клевера лугового на базе генетического источника самосовместимости. Целью данной работы было создание нового селекционного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости и разработка селекционной программы. Исследования проводили в условиях селекционного тепличного комплекса (СТК) и в камерах искусственного климата с контролируемыми условиями среды. В качестве исходного материала использовали сорт отечественной селекции Ранний 2, селекционный образец № 226 Бц с маркером белоцветковости соцветий и дикорастущий образец № 3000 I₂ с признаком самосовместимости. В процессе исследований применяли ручное перекрёстное, самоопыление цветков с использованием дополнительной изоляции и свободное опыление в естественных условиях. На основе дикорастущего генотипа с признаком самосовместимости сформирован образец № 3000 I₁, характеризующийся высокой завязываемостью семян при самоопылении (77%). Установлена высокая наследуемость данного признака уже в F₁-поколении: количество генотипов с уровнем завязываемости более 50% колебалось в пределах 50–70%. Созданы гибридные комбинации Ранний 2_♀ × № 3000 I_2♂ и № 226 Бц_♀ × №3000 I_2♂ в поколениях I₁–I₃. Оценка инцухт-потомства I₁–I₃ показала увеличение количества высокосамосовместимых генотипов: у гибрида Ранний 2 × № 3000 I₂ — на 60%, у гибрида № 226 Бц × № 3000 I₂ — на 50% от общего числа растений. К I₄-поколению процент средне- и высокосамосовместимых генотипов достигал 100% при полном отсутствии несовместимых и слабосовместимых генотипов. На основе линейного материала (Ранний 2 × № 3000 I₂) I₄ сформированы многолинейные популяции F₁ и оценены по семенной продуктивности. Установлено, что самосовместимые гибриды по количеству соцветий превосходили сорт Ранний 2 на 19%, по завязываемости семян — на 25–31%, по массе семян с одного растения — на 18–24%. Разработана селекционная программа по созданию исходного материала клевера лугового (Trifolium prаtense L.) с высокой семенной продуктивностью с использованием генетического источника самосовместимости.

Ключевые слова: клевер луговой, семенная продуктивность, генетический источник, самосовместимость, самоопыление, многолинейные популяции, селекционная программа.

Многолетние травы являются ведущей группой среди кормовых культур, они выполняют системообразующую и экологическую функции, обеспечивающие устойчивое и эффективное кормопроизводство (Косолапов и др., 2011). Ведущая роль среди многолетних трав принадлежит бобовым культурам, в частности клеверу луговому, который характеризуется высокой белковой продуктивностью, низкой энергоёмкостью выращивания, разнообразным использованием кормовой массы, невысокой требовательностью к плодородию почвы, высокой азотфиксирующей способностью (Новосёлов, Шпаков, Рудоман, 2010; Новосёлов, 2015; Дробышева, Зятчина, 2016; Полюдина, 2017). В настоящее время в связи с неудовлетворительным состоянием сельского хозяйства общая площадь под клевером луговым сократилась почти в 2 раза. Одним из сдерживающих факторов расширения посевов клевера лугового является его низкая семенная продуктивность в производственных посевах, которая составляет 0,10–0,15 т/га, хотя потенциальная урожайность семян может достигать более 1,0 т/га (Михайличенко и др., 1987; Новосёлова, Косицина-Пинегина, 1987; Переправо, Золотарев, Георгиади, 2015).

Причины низкой реализации потенциальной семенной продуктивности клевера лугового разнообразны. Это и особенности развития цветков в соцветии, и различные нарушения в строении семязачатков, и поражаемость вредителями и болезнями, что ведёт к опадению соцветий, цветков и бобов, и неблагоприятные погодные условия, способствующие полеганию посевов и неравномерному цветению (Зарьянова, Кирюхин, 2012).

Так как клевер луговой является строго перекрёстноопыляемым растением с гаметофитной несоместимостью, то урожайность семян напрямую зависит от насекомых опылителей, которые осуществляют перенос пыльцы на рыльце пестика при раскрытии цветка (триппинг). Прорастание собственной пыльцы, попавшей на рыльце в результате триппинга, блокируется генетической системой несовместимости, которая контролируется 37 аллелями локуса S и генами, тесно сцепленными или идентичными гену P, контролирующему красную окраску цветка, а также генами-модификаторами. Следствием этого является крайне низкая семенная продуктивность при самоопылении. Одним из способов преодоления самонесовместимости может быть использование в гибридизации видов-доноров генов автофертильности, которые могут устранять самонесовместимость при опылении, тем самым повышая семенную продуктивность (Писарев, 1935; Поплавская, 1974; Мухина, Станкевич, 1993; Верещагина, Колесникова, Новосёлова, 2004). Такие генотипы клевера лугового, обладающие признаком самосовместимости, были обнаружены Жуковским и Лисицыным в образцах, собранных на Памире и горном Алтае, произрастающих в условиях пространственной изоляции и ограниченного количества естественных опылителей (Серебровский, 1969).

Таким образом, целью данной работы было создание нового селекционного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости и разработка селекционной программы.

Методика исследований. Исследования проводили в условиях селекционного тепличного комплекса (СТК) и в камерах искусственного климата с контролируемыми условиями среды согласно методическим рекомендациям (Методические рекомендации по технологии выращивания трёх поколений клевера и люцерны в оранжереях и камерах с контролируемыми условиями среды в течение года, 1981; Методические указания по селекции и первичному семеноводству клевера, 2002; Новосёлов, 2005). В качестве исходного материала использовали сорт отечественной селекции Ранний 2, селекционный образец № 226 Бц с маркером белоцветковости соцветий и дикорастущий образец № 3000 I₂ с признаком самосовместимости.

В процессе исследований применяли ручное перекрёстное, самоопыление цветков с использованием дополнительной изоляции и свободное опыление в естественных условиях.

Результаты исследований. Из дикорастущей популяции, произрастающей в горном Таджикистане, был выделен генетический источник самосовместимости и сформирован образец № 3000 I₁, завязываемость семян которого при самоопылении составляла 77% (Старшинова, Новосёлов, 2015).

Для изучения наследуемости признака самосовместимости были проведены реципрокные скрещивания между сортом Ранний 2 и самосовместимым образцом № 3000 I₂. Дальнейшая оценка гибридного поколения F₁ клевера лугового показала, что уровень завязываемости семян от самоопыления достаточно высокий: в прямой комбинации скрещивания (Ранний 2_♀ × № 3000 I_2♂) — 52%, в обратной (№ 3000 I_2♀ × Ранний 2_♂) — 71%. Также установлено, что у ряда генотипов уровень самосовместимости превышал 100%, что указывает на формирование некоторого количества семян от самоопыления при механическом воздействии на соцветие без триппинга. Исходя из этого, в селекционной практике для получения чистого гибридного потомства в скрещиваниях мы использовали в качестве материнской формы самонесовместимые генотипы. Полученные данные говорят о высокой наследуемости признака самосовместимости у выявленного генетического источника и возможности проведения отборов уже в F₁-поколении (Новосёлов и др., 2017).

На основе полученных данных для создания нового исходного селекционного материала с высокой семенной продуктивностью были проведены скрещивания между генотипами образца № 3000 I₂ сорта Ранний 2 и образца № 226 Бц. В качестве материнской формы использовали растения сорта Ранний 2 и образца № 226, отцовской — генотипы № 3000 I₂. Полученные гибриды F₁ (Ранний 2_♀ × № 3000 I_2♂) и F₁ (№ 226 Бц_♀ × №3000 I_2♂) характеризовались достаточно высокой завязываемостью семян при перекрёстном опылении — 73 и 62% соответственно.

Для получения поколения I₁ было проведено самоопыление по каждому генотипу отдельно и установлено, что средняя завязываемость семян у исследуемых гибридов при таком способе опыления высокая: у F₁ (Ранний 2_♀ × № 3000 I_2♂) — 57%, у F₁ (№ 226 Бц_♀ × № 3000 I_2♂) — 64%, что подтверждает полученные нами ранее данные о высокой степени наследуемости признака самосовместимости (табл. 1).

Для анализа гибридного потомства по степени проявления свойства самосовместимости все анализируемые генотипы были разделены на четыре группы по завязываемости семян (рис. 1):

1. самонесовместимые (0–3%);
2. слабосовместимые (3–10%);
3. среднесовместимые (10–50%);
4. высокосовместимые (более 50%).

1. Изучение наследуемости признака самофертильности у гибридов F₁ клевера лугового

Рис. 1. Характеристика расщепления генотипов клевера лугового по признаку самосовместимости в гибридном потомстве F₁

Наибольшее число генотипов было представлено первой и четвёртой группами: количество самонесовместимых генотипов в гибридной комбинации F₁ (Ранний 2 ♀ × № 3000 I₂ ♂) составило 15%, в F₁ (№ 226 Бц ♀ × № 3000 I₂ ♂) — 16%; высокосовместимых — 58 и 68% соответственно. Слабо- и среднесовметимые генотипы занимали промежуточное положение в наследовании данного свойства и их количество варьировалось от 3 до 15%.

Для дальнейшей работы были отобраны растения с уровнем самосовместимости более 50%: у гибрида F₁ (Ранний 2 ♀ × № 3000 I₂ ♂) — 19 генотипов, у гибрида F₁ (№ 226 Бц ♀ × № 3000 I₂ ♂) — 21 генотип.

В процессе исследований по данной схеме было проведено искусственное самоопыление, повторяющееся в четырёх последовательных поколениях, и получены гомозиготные самофертильные линии в I₄-поколении (табл. 2).

2. Создание гомозиготного многолинейного материала клевера лугового по признаку самосовместимости

В результате анализа полученных данных чётко прослеживается увеличение количества высокосамосовместимых генотипов от I₁ к I₄: у гибрида F₁ (Ранний 2 × № 3000 I₂) — на 60%, у F₁ (№ 226 Бц × № 3000 I₂) — на 50% от общего числа растений. Также стоит отметить, что в I₃-поколении у изучаемых гибридных комбинаций не наблюдается самонесовместимых и слабосовместимых растений с уровнем завязываемости семян от 0 до 10% (табл. 2).

Стандарт Ранний 2 в трёх закладках имел практически нулевую завязываемость семян, тем самым подтверждая свою самонесовместимость.

Таким образом, к I₄-поколению процент средне- и высокосамосовместимых генотипов достигает 100% при полном отсутствии несовместимых и слабосовместимых генотипов.

В 2018 году между генотипами I₄-поколения с уровнем самосовместимости более 50% была проведена гибридизация и получены гибриды (Ранний 2 × № 3000 I₂) F₁) I₄) F₁ и (№ 226 × № 3000 I₂) F₁) I₄) F₁, семена которых были объединены, и сформированы многолинейные популяции с признаком самосовместимости.

В 2019 году был заложен вегетационный опыт по оценке семенной продуктивности самосовместимых многолинейных популяций (Ранний 2 × № 3000 I₂) F₁) I₄) F₁ и (№ 226 × № 3000 I₂) F₁) I₄) F₁ при свободном опылении в естественных условиях. В качестве стандарта использовали сорт Ранний 2 (табл. 3).

В результате исследований было установлено, что у испытываемых образцов количество стеблей было на уровне стандарта — в среднем 6 шт./растение. По количеству соцветий самосовместимые гибриды превосходили сорт Ранний 2 на 19–20%. Количество цветков в одной головке в среднем по вариантам находилось в пределах от 114 до 134 шт. Уровень завязываемости семян у самосовместимого гибрида (№ 226 × 3000) I₄) F₁ составил 80%, у образца ((Ранний 2 × 3000) I₄) F₁ — 84%, что на 25–31% выше, чем у стандарта. Масса 1000 семян у исследуемых образцов находилась в пределах 2,0–2,2 г и уступала по этому показателю сорту Ранний 2 на 19–26%. В связи с тем, что самосовместимые образцы отличались повышенным количеством соцветий и высоким коэффициентом завязывамости семян, масса семян с одного растения у них составила 6,0–6,3 г, что на 18–24% выше, чем у стандартного сорта Ранний 2.

3. Оценка семенной продуктивности самосовместимых образцов клевера лугового

На основе полученных данных была разработана селекционная программа по созданию исходного материала клевера лугового (Trifolium prаtense L.) с высокой семенной продуктивностью с использованием генетического источника самосовместимости (рис. 2).

В основу данной программы входили следующие этапы:

• поиск, выделение и формирование генетического источника самосовместимости клевера лугового с уровнем завязываемости семян от самоопыления более 50%;

Рис. 2. Селекционная программа по созданию исходного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости

I₅

I₄

I₃

Отбор самосовместимых генотипов и создание линейного материала

I₂

Получение гибридов F₁ клевера лугового на основе сортов, сортообразцов и источника самосовместимости

Изучение гибридов F₁ на наследуемость признака самосовместимости. Получение поколения I₁

Создание

многолинейного материала F₁ на основе лучших линий I₅

Изучение гибридов F₁ в контрольном питомнике по семенной продуктивности

• получение гибридов F₁ клевера лугового на основе сортов, сортообразцов и источника самосовместимости;
• изучение гибридов F₁ клевера лугового на наследуемость признака самосовместимости и отбор генотипов с уровнем самосовместимоти более 50%;
• получение последовательных поколений I₁–I₅ и отбор генотипов с уровнем самосовместимости более 50%;
• создание многолинейного материала F₁ на основе лучших линий I₅ -поколения;
• изучение самосовместимых многолинейных гибридов F₁ в контрольном питомнике по семенной продуктивности.

Заключение. Таким образом, в результате исследований был создан исходный селекционный материал клевера лугового, характеризующийся высоким процентом завязываемости семян (80–84%) и повышенной семенной продуктивностью, превышающий сорт Ранний 2 на 18–24%, и разработана селекционная программа по созданию исходного селекционного материала клевера лугового с высокой семенной продуктивностью на основе генетического источника самосовместимости, которая может быть использована в селекционной практике для создания сортов с высокой и стабильной семенной продуктивностью.

Литература

1. Дробышева Л. В. Селекция различных видов бобовых трав на повышение эффективности симбиоза / Л. В. Дробышева, Г. П. Зятчина // Адаптивное кормопроизводство. — 2016. — № 3. — С.94–108.
2. Зарьянова З. А. Особенности полиэмбрионии клевера лугового (Trifolium pratense L.) в связи с селекцией на повышенную семенную продуктивность / З. А. Зарьянова, С. В. Кирюхин // Зернобобовые и крупяные культуры. — 2018. — № 4 (28). — С.125–130.
3. Многофункциональное кормопроизводство России / В. М. Косолапов, И. А. Трофимов, Л. С. Трофимова, Е. П. Яковлева // Кормопроизводство. — 2011. — № 10. — С.3–5.
4. Методические рекомендации по технологии выращивания трёх поколений клевера и люцерны в оранжереях и камерах с контролируемыми условиями среды в течение года. — Москва: ВАСХНИЛ, ВИК, 1981. — 43 с.
5. Методические указания по селекции и первичному семеноводству клевера. — Москва: Россельхозакадемия, 2002. — 72 с.
6. Интенсивные технологии возделывания клевера лугового на семена / Б. П. Михайличенко, В. И. Антонов, Н. И. Переправо, С. В. Пилипко // Повышение эффективности клеверосеяния. — Москва: ВНИИ кормов, 1987. — С.116–123.
7. Мухина Н. А. Культурная флора: многолетние травы (клевер, лядвенец). Т. XIII / Н. А. Мухина, А. К. Станкевич. — Москва: Колос, 1993. — 336 с.
8. Новосёлов М. Ю. Влияние условий искусственного климата на генетико-морфологические признаки и сокращение селекционного процесса клевера лугового / М. Ю. Новосёлов // Селекция и семеноводство многолетних трав. — Москва, 2005. — С.24–27.
9. Новосёлов М. Ю. Клевер луговой (Trifolium pratense (L.) / М. Ю. Новосёлов // Основные виды и сорта кормовых культур. — Москва: Наука, 2015. — С.22–73.
10. Выявление и оценка генетических источников самосовместимости у клевера лугового для создания сортов с высокой и стабильной семенной продуктивностью / М. Ю. Новосёлов, О. А. Старшинова, Л. В. Дробышева, Г. П. Зятчина // Кормопроизводство. — 2017. — № 4. — С.21–24.
11. Роль бобовых культур в совершенствовании полевого травосеяния / Ю. К. Новосёлов, А. С. Шпаков, М. Ю. Новосёлов, В. В. Рудоман // Кормопроизводство. — 2010. — № 7. — С.19–22.
12. Новосёлова А. С. Влияние генетически обусловленного признака двусемянности боба на семенную продуктивность клевера лугового / А. С. Новосёлова, Е. Н. Пинегина // Генетические методы в селекции кормовых трав. — Вильнюс, 1987. — С.31–32.
13. Переправо Н. И. Состояние и перспективы развития клеверосеяния и семеноводства клевера разных видов в России / Н. И. Переправо, В. Н. Золотарев, Н. И. Георгиади // Адаптивное кормопроизводство. — 2015. — № 1. — С.14–27.
14. Писарев В. Е. Инцухт. Т. 1. / В. Е. Писарев. — Москва, 1935. — 604 с.
15. Полюдина Р. И. Клевер в Сибири / Р. И. Полюдина. — Новосибирск: СФНЦА РАН, 2017. — 348 с.
16. Поплавская Е. И. Обсеменённость и самоопыление клевера красного / Е. И. Поплавская // Селекция и семеноводство. — 1974. — № 5. — С.39–40.
17. Серебровский А. С. Селекция животных и растений / А. С. Серебровский. — Москва: Колос, 1969. — 159 с.
18. Старшинова О. А. Изучение и оценка географически отдалённых форм клевера лугового (Trifolium pratense L.) для создания нового селекционного материала / О. А. Старшинова, М. Ю. Новосёлов // Международная научная конференция «Роль ботанических садов в сохранении и мониторинге биоразнообразия». — Ростов-на- Дону, 2015. — С.432–435.

Breeding of self-compatible parent lines of high-productive red clover

Starshinova O. A.

Federal Williams Research Center of Fodder Production and Agroecology, Laboratory of Clover Breeding and Seed production

141055, Russia, the Moscow region, Lobnya, Science Town, 1

E-mail: o.starshinova@bk.ru

The paper reports on breeding of self-compatible parent lines of red clover. The aim of the research was obtaining of new breeding material of red clover with high seed productivity using self-compatibility and development of the breeding program. Plants were grown in growth chambers. “Ranniy 2” variety, white-flowered line No. 226 Bts and self-compatible wild genotype No. 3000 I₂ performed as parent material. Self-compatibility of the wild genotype was introduced into the new line No. 3000 I₁, showing intensive seed formation when self-pollinating (77%). F₁ showed high heritability of that trait. “Ranniy 2”_♀ × No. 3000 I_2♂ and No. 226 Bts_♀ × No. 3000 I_2♂ hybrids were obtained in I₁–I₃ generations. I₁–I₃ lines had higher number of self-compatible genotypes: “Ranniy 2” × No. 3000 I₂ hybrid — by 60%, No. 226 Bts × No. 3000 I₂ — by 50% of the total plant number. By the I₄ generation proportion of genotypes with medium or high self-compatibility reached 100%. “Ranniy 2” × No. 3000 I₂ was used to obtain multiline populations. Self-compatible hybrids exceeded “Ranniy 2” in inflorescence number by 19%, in seed formation — by 25–31%, in seed mass from one plant — by 18–24%. The breeding program was developed.

Keywords: red clover, seed productivity, genetic resources, self-compatibility, self-pollination, multiline population, breeding program.

References

1. Drobysheva L. V. Selektsiya razlichnykh vidov bobovykh trav na povyshenie effektivnosti simbioza / L. V. Drobysheva, G. P. Zyatchina // Adaptivnoe kormoproizvodstvo. — 2016. — No. 3. — P.94–108.

2. Zaryanova Z. A. Osobennosti poliembrionii klevera lugovogo (Trifolium pratense L.) v svyazi s selektsiey na povyshennuyu semennuyu produktivnost / Z. A. Zaryanova, S. V. Kiryukhin // Zernobobovye i krupyanye kultury. — 2018. — No. 4 (28). — P.125–130.

3. Mnogofunktsionalnoe kormoproizvodstvo Rossii / V. M. Kosolapov, I. A. Trofimov, L. S. Trofimova, E. P. Yakovleva // Kormoproizvodstvo. — 2011. — No. 10. — P.3–5.

4. Metodicheskie rekomendatsii po tekhnologii vyrashchivaniya trekh pokoleniy klevera i lyutserny v oranzhereyakh i kamerakh s kontroliruemymi usloviyami sredy v techenie goda. — Moscow: VASKhNIL, VIK, 1981. — 43 p.

5. Metodicheskie ukazaniya po selektsii i pervichnomu semenovodstvu klevera. — Moscow: Rosselkhozakademiya, 2002. — 72 p.

6. Intensivnye tekhnologii vozdelyvaniya klevera lugovogo na semena / B. P. Mikhaylichenko, V. I. Antonov, N. I. Perepravo, S. V. Pilipko // Povyshenie effektivnosti kleveroseyaniya. — Moscow: VNII kormov, 1987. — P.116–123.

7. Mukhina N. A. Kulturnaya flora: mnogoletnie travy (klever, lyadvenets). Vol. XIII / N. A. Mukhina, A. K. Stankevich. — Moscow: Kolos, 1993. — 336 p.

8. Novoselov M. Yu. Vliyanie usloviy iskusstvennogo klimata na genetiko-morfologicheskie priznaki i sokrashchenie selektsionnogo protsessa klevera lugovogo / M. Yu. Novoselov // Selektsiya i semenovodstvo mnogoletnikh trav. — Moscow, 2005. — P.24–27.

9. Novoselov M. Yu. Klever lugovoy (Trifolium pratense (L.) / M. Yu. Novoselov // Osnovnye vidy i sorta kormovykh kultur. — Moscow: Nauka, 2015. — P.22–73.

10. Vyyavlenie i otsenka geneticheskikh istochnikov samosovmestimosti u klevera lugovogo dlya sozdaniya sortov s vysokoy i stabilnoy semennoy produktivnostyu / M. Yu. Novoselov, O. A. Starshinova, L. V. Drobysheva, G. P. Zyatchina // Kormoproizvodstvo. — 2017. — No. 4. — P.21–24.

11. Rol bobovykh kultur v sovershenstvovanii polevogo travoseyaniya / Yu. K. Novoselov, A. S. Shpakov, M. Yu. Novoselov, V. V. Rudoman // Kormoproizvodstvo. — 2010. — No. 7. — P.19–22.

12. Novoselova A. S. Vliyanie geneticheski obuslovlennogo priznaka dvusemyannosti boba na semennuyu produktivnost klevera lugovogo / A. S. Novoselova, E. N. Pinegina // Geneticheskie metody v selektsii kormovykh trav. — Vilnyus, 1987. — P.31–32.

13. Perepravo N. I. Sostoyanie i perspektivy razvitiya kleveroseyaniya i semenovodstva klevera raznykh vidov v Rossii / N. I. Perepravo, V. N. Zolotarev, N. I. Georgiadi // Adaptivnoe kormoproizvodstvo. — 2015. — No. 1. — P.14–27.

14. Pisarev V. E. Intsukht. T. 1. / V. E. Pisarev. — Moscow, 1935. — 604 p.

15. Polyudina R. I. Klever v Sibiri / R. I. Polyudina. — Novosibirsk: SFNTsA RAN, 2017. — 348 p.

16. Poplavskaya E. I. Obsemenennost i samoopylenie klevera krasnogo / E. I. Poplavskaya // Selektsiya i semenovodstvo. — 1974. — No. 5. — P.39–40.

17. Serebrovskiy A. S. Selektsiya zhivotnykh i rasteniy / A. S. Serebrovskiy. — Moscow: Kolos, 1969. — 159 p.

18. Starshinova O. A. Izuchenie i otsenka geograficheski otdalennykh form klevera lugovogo (Trifolium pratense L.) dlya sozdaniya novogo selektsionnogo materiala / O. A. Starshinova, M. Yu. Novoselov // Mezhdunarodnaya nauchnaya konferentsiya “Rol botanicheskikh sadov v sokhranenii i monitoringe bioraznoobraziya”. — Rostov-na-Donu, 2015. — P.432–435.